大鼠心肌細(xì)胞的消化

　　取一只加蓋燒杯，內(nèi)放一塊用乙醚飽和的紗布，把0~3日齡的大鼠幼鼠放進(jìn)該燒杯中麻醉，用2%碘酒和75%酒精消毒胸腹皮膚，在無(wú)菌條件下開(kāi)胸取出心臟，立即置于4ºCD-Hanks液(mmol/L：Nacl137,Kcl5.4,Na2HPO40.37,K2HPO40.44,NaHCO34.2)中剪取心室肌，洗凈殘血，剪成約1mm³大小的組織塊，棄去D-Hanks液加入0.08%胰蛋白酶液10~15ml，于37°C靜置5min，吸出上層懸液，并加入等量的含血清培養(yǎng)基。經(jīng)終止消化后離心(1800r/min)棄上清液，加入含血清的培養(yǎng)液。吹散沉淀細(xì)胞，同條件下離心，用10%血清培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液，置于37°C含5%CO2培養(yǎng)箱中。

心肌細(xì)胞分離

　　根據(jù)心肌細(xì)胞(大鼠心肌細(xì)胞)和非心肌細(xì)胞貼壁時(shí)間的不同采用2小時(shí)差速貼壁，分別獲得心肌成纖維細(xì)胞和心肌細(xì)胞。心肌細(xì)胞按1*106個(gè)細(xì)胞/ml種于50ml培養(yǎng)液中，培養(yǎng)的前2天在心肌細(xì)胞培養(yǎng)液中加入5-溴脫氧嘧啶核苷0.1mmol/l，以抑制非心肌細(xì)胞增殖，所有培養(yǎng)的心肌細(xì)胞均每2天換液一次。

　　1.3心肌細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)

　　當(dāng)心肌細(xì)胞(大鼠心肌細(xì)胞)培養(yǎng)24小時(shí)后換無(wú)血清培養(yǎng)液（含DMEM培養(yǎng)液，胰島素10?g/ml,鐵蛋白10?g/ml，維生素C100?g/L維生素B121.5µmol/L）繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí),每隔8小時(shí)換液一次,盡量保持各添加成分濃度不變,*后收集細(xì)胞,進(jìn)行測(cè)定。

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