人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞簡(jiǎn)單介紹
　　人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（英Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVEC）在進(jìn)行血管內(nèi)皮細(xì)胞實(shí)驗(yàn)時(shí)，通常選用的細(xì)胞模型為人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（Human umbilical vein endothelial cells，簡(jiǎn)稱HUVECs)。而不是直接采用靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞或動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞。原因是臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞具有干細(xì)胞的潛能，理論上可以傳代50-60次。

細(xì)胞復(fù)蘇

　　從液氮中取出細(xì)胞凍存管，迅速放入37℃水浴中解凍至管內(nèi)殘留一點(diǎn)冰屑。用75%酒精擦拭凍存管后，將內(nèi)容物吸至一15ml無菌離心管中，逐滴加入預(yù)溫至37℃的RPMI-1640培液4－5ml混勻，室溫1500rpm離心10分鐘棄上清。再用RPMI-1640培液4－5ml洗滌一次，離心后棄上清，加HUVEC完全培養(yǎng)液4－5ml備用，每支HUVEC凍存管含細(xì)胞量為5×105個(gè)。

消化細(xì)胞

　　消化液：用pH7.0-7.2的PBS或D-Hank’S液，分別配制0.25%胰酶液和0.02%EDTA-Na2液，用前按1：1混合。在細(xì)胞傳代或凍存前先消化細(xì)胞。具體操作如下：吸凈培養(yǎng)液，每瓶加消化液1ml，搖勻使其布滿培養(yǎng)瓶細(xì)胞面。37℃消化2-5分鐘。顯微鏡下看細(xì)胞回縮成圓形后，輕輕震動(dòng)使絕大部細(xì)胞脫落后，每瓶加含10%FBS的RPMI-1640液的中和液4-5ml中和胰酶的消化作用，并用吸管輕輕吹打培養(yǎng)面使細(xì)胞完全脫落后，吸至15ml無菌離心管內(nèi)。4℃1500rpm離心10分鐘棄上清，再用中和液洗滌細(xì)胞，離心棄上清，加適量RPMI-1640液，混勻后取10ul 細(xì)胞懸液加10ul臺(tái)盼藍(lán)混勻后作細(xì)胞計(jì)數(shù)，按需要做步驟四或五。

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